凱氏定氮實驗的原理與方法測定原理：

待測天然含氮有機物與濃硫酸共熱時，被氧化成為二氧化碳和水，而氮轉(zhuǎn)變成氨，氨再與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。為了加速有機物質(zhì)的分解反應(yīng)，在消化時常加入促進劑，硫酸銅可用作催化劑，硫酸鉀或硫酸鈉可提高消化液的沸點，氧化劑如過氧化氫也能加速反應(yīng)。

操作方法：樣品處理 測定某一固體樣品中蛋白質(zhì)的含量都是按100克物質(zhì)的干重中所含蛋白質(zhì)的克數(shù)來表示。因此在定氮前應(yīng)先將固體樣品中的水分除去。步驟：先將樣品磨細，在已稱重的稱量瓶中稱入一定量樣品，然后置105度（100度無法除去非游離水）的烘箱內(nèi)干燥2小時后稱重，以后每1小時再稱重，直至2次稱重數(shù)不變?yōu)橹埂?/p>

若樣品屬于液體物質(zhì)，可取一定體積經(jīng)適當稀釋后，取一定量進行消化。

消化 根據(jù)樣品量的多少選擇適宜的凱氏燒瓶4個（此處以50毫升為例），其中2個為對照。向燒瓶內(nèi)加入準確稱量的樣品，注意要把樣品加至燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。另外2個作空白對照，好對樣品進行校正。

在每個燒瓶中加入約300毫克硫酸鉀-硫酸銅混合物（硫酸鉀：五水硫酸銅=3：1、6：1或10：1均可），再用量筒加入3毫升濃硫酸。將上述4個凱氏燒瓶放在通風良好處（在通風櫥中進行）加熱消化。先用小火加熱至沸騰。此時會產(chǎn)生大量泡沫，應(yīng)特別注意不能讓黑色物質(zhì)上升到燒瓶頸部，否則將嚴重影響分析結(jié)果。當混合物停止冒泡，蒸汽與二氧化硫也均勻地放出時，將火焰調(diào)節(jié)到保持瓶內(nèi)液體微微沸騰。假若發(fā)現(xiàn)瓶頸上有黑色顆粒，應(yīng)小心地將燒瓶傾斜振搖，用消化液將其洗下。在消化過程中要時常轉(zhuǎn)動燒瓶，使全部樣品都浸在消化液中。當消化液呈清澈淡藍色時即告消化結(jié)束。時間一般在5~6小時！若樣品中含賴氨酸或組氨酸較多時，消化時間需要延長1~2倍。因為這兩種氨基酸中的氮在短時間內(nèi)不易消化*。

蒸餾 采用改良式凱氏定氮儀。

1、洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑（取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示劑約1毫升，搖勻后呈紫紅色即可；混合指示劑：50毫升0.1%甲烯藍乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇，存于棕色瓶中）檢測是否清洗干凈。干凈標準：指示劑不變色。

2、樣品和空白的蒸餾：取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應(yīng)室，關(guān)閉加樣口，另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端。取30%氫氧化鈉（W/W）溶液約10毫升，從加樣口緩慢加入，當未加完時關(guān)閉，并加入約3毫升蒸餾水，再繼續(xù)緩慢加入一半后關(guān)閉，讓剩下的水作液封。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱（注：在清洗儀器完畢后應(yīng)拿走加熱器），待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始計時，蒸餾5分鐘，然后移動三角瓶使液面離開冷凝管口約1厘米，并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周，繼續(xù)蒸餾1分鐘。空白同樣。

3、清洗儀器：同上，不*指示劑。

滴定 用0.0100mol/L標準鹽酸（要標定，費時）滴定三角瓶中收集的氨，直至硼酸指示劑由綠變紫紅。

注意：蒸餾時試驗室環(huán)境中切忌有堿性霧氣，否則要影響分析精度。